Требования к тестам, используемым для выявления ДНК ВПЧ высокого риска

ВПЧ-тест должен выявлять только типы высокого канцерогенного риска

Не следуя этому правилу и выявляя все генотипы ВПЧ, результат тестирования будет иметь крайне низкую диагностическую специфичность и информативность, так как подобные тесты, наряду с генотипами высокого канцерогенного риска, будут выявлять генотипы не ответственные за развитие предрака и РШМ и часто вообще не связанные с какой бы то ни было патологией урогенитального тракта. Тест-системы «АмплиСенс» производства ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии» Роспотребнадзора выявляют исключительно генотипы высокого канцерогенного риска.

• ВПЧ-тест должен обнаруживать не менее десяти генотипов (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59), что обеспечивает более чем 95%-ную диагностическую чувствительность теста

Из эпидемиологических данных по распространенности различных генотипов ВПЧ высокого риска в РШМ следует, что выявление лишь 2 наиболее распространенных генотипов ВПЧ 16 и 18 будет обладать низкой диагностической чувствительностью (будет выявлено около 72% всех опухолей). Высокой диагностической чувствительностью будут обладать лишь тесты, выявляющие широкий спектр генотипов ВПЧ высокого риска. Выявление 10 наиболее распространенных генотипов ВПЧ позволяет выявлять 95%-99% всех случаев РШМ. Предназначенные для скрининга тест-системы «АмплиСенс» выявляют не менее 10 наиболее распространеных генотипов ВПЧ высокого риска.

• ВПЧ-тест должен иметь возможность выявлять только клинически значимую концентрацию вируса или дифференцировать клинически значимую от незначимой, что существенным образом сказывается на специфичности исследования

Основаниями для введения порога клинической значимости послужил ряд работ, указывающих на то, что вирусная нагрузка ниже определенного значения («порог значимости») не встречается в образцах тяжелой дисплазии и рака и ассоциирована с регрессией инфекции (клинически незначимое инфицирование). Нагрузка выше данного порога обозначается как клинически значимое инфицирование. Так же выделяется второй порог («порог прогрессии»). Вирусная нагрузка выше данного значения обозначается как повышенная и ассоциирована с большей вероятностью наличия или прогрессии в CIN2,3. На основании проведенных в ЦНИИ Эпидемиологии исследований и данных мировой литературы были определены и валидированы пороговые значения концентрации ВПЧ в образце: 3 логарифма (или 103) геномов ВПЧ на 100 тыс. клеток человека — порог клинической значимости, 5 логарифмов ВПЧ на 100 тыс. клеток – порог прогрессии. В ходе валидации показано, что введение порога клинической значимости позволяет более чем на 20% повысить диагностическую специфичность исследования, при сохранении диагностической чувствительности. Скрининговые тест-системы «АмплиСенс», работающие по принципу ПЦР в реальном времени (FRT), позволяют выявлять точное количество вируса и нормировать его на количество попавших в образец клеток человека, что нивелирует вариации результата, связанные с неадекватным забором материала. Все расчеты проводятся автоматически. Для тест-систем, использующих принцип электрофоретической детекции или детекции конечной флуоресценции (FEP) разработан и валидирован на клиническом материале алгоритм выявления только клинически значимой концентрации вируса основанный на разведении образца.

• ВПЧ-тест должен быть клинически валидирован; должен обладать высокой чувствительностью выявления предраковых состояний (CIN2,3) и высокой специфичностью

Все тест-системы «АмплиСенс» для выявления ВПЧ высокого риска прошли валидацию на гистологически верифицированных клинических образцах с диагнозом В-ПИП/H-SIL и образцах от женщин без патологии шейки матки верифицированных как «норма» в двойных цитологических исследованиях. В ходе валидации были рассчитаны показатели диагностических чувствительности и специфичности по отношению к тяжелой дисплазии и РШМ (для тестов с введением порога клинической значимости).