Формирование структуры (в том числе генетической) воспроизводимых видов и популяций.

Предполагают, что сроки захода на нерест наследственны, то есть внутри популяции существуют субпопуляционные группировки, которые отличаются еще по половому составу: в начале нереста самцов больше, чем самок, в разгар нереста их количество одинаково, в конце нереста преобладают самки.

Кроме того, для каждой популяции существует определенное соотношение генотипов. Когда мы используем какую-то часть производителей, попадаются в основном производители с наиболее распространенным генотипом, то есть те, которые больше. Таким образом мы производим искусственные отбор, сужаем генетическую базу.

В рыбоводных целях необходимо использовать производителей в течение всей нерестовой миграции пропорцианально этой миграции, то есть поддерживать все группы в том же соотношении, в каком они находятся в естественных условиях и этим самым поддерживать разнообразие субпопуляции.

К загрязнению популяции, её дисбалансу приводит заготовка производителей для искусственного воспроизводства на одном рыбзаводе на разных реках. Этого делать недопустимо.

Рассмотрим технологию работы с производителями разных биологических групп на примере осетровых.

Работа с яровыми группами осетровых. Естественные нерест у ранних яровых форм — середина мая ачало июня, поздних яровых – июль-август. В связи с гидростроительством нерестовый ход всех яровых форм нарушился, изменилось их физиологическое состояние и структура нерестовых популяций. В результате во время их массового хода в реки в мае и даже в июне в нерестовой части популяции присутствует значительная часть самок с гонадами в IV незавершенной стадии зрелости (то есть IIIIV). Поэтому производители осетровых, которых отлавливают на промысловых тонях для заводского разведения, оказываются очень неоднородными и от большинства из них нельзя получить зрелые ПК.

Первым этапом работы с яровыми осетровыми является отбор производителей с текучими ПП и с гонадами в IV незавершенной стадии зрелости. От первых можно сразу получить икру и молоки пригодные для рыбоводных целей, от вторых – после кратковременного (1-3 суток) выдерживания в прудах, садках или бассейнах и однократного инъецирования препаратом гипофиза или сурфагана.

Для получения зрелых ПП у производителей с ооцитами в IV незавершенной стадии зрелости (IIIIV) их выдерживают более длительное время (до 1,5 мес.) и применяют повторные инъекции: сначала вводят в несколько приемов очень небольшие дозы препарата, которые ускоряют поляризацию ооцитов и переход их в завершенную IV стадию СЗ, а спустя 24 часа инъецируют сразу большую дозу, принятую для данного вида, которая вызывает созревание и овуляцию овоцитов.

Если производители находятся в угнетенном состоянии, не реагирующие на однократную инъекцию, то применяют метод дробных инъекций, при этом общую дозу препарата гипофиза не увеличивают, а разделяют на 2-е части: сначала вводят меньшую часть (например, при работе с севрюгой 1/7 часть общей дозы), а через 5-8 часов – большую (6/7 общей дозы).

Для повышения эффективности работы с яровыми весенне нерестующими производителями и удлинению периода, в течение которого от них можно получить икру, отловленных производителей в начале нерестового хода (при температурах ниже нерестовых) помещают в бассейны Казанского с проточной водой и регулируемой температурой и выдерживают при температуре 2-3 С в течение до 3-х месяцев. К концу времени, когда необходимо получать зрелые ПП, в бассейнах постепенно повышают температуру до нерестовой и инъецируют производителей.

При длительном выдерживании или транспортировке производителей при нерестовых температурах, а также при переохлаждении в бассейнах с терморегуляцией, подавляется их способность реагировать на гипофизарную инъекцию созреванием овоцитов. Это происходит вследствие изменения реактивности клеток фолликулярного эпителия к действию гонадотропных гормонов. Восстановить реактивность клеток фолликулярного эпителия и потом после гипофизарных инъекций получить пригодную для рыбоводства икру можно с помощью инъекции самкам препарата трийодтиронина (гормона щитовидной железы). Для этого можно использовать аптечный препарат трийодторонина (таблетки по 5- мг растирают в ступке, добавляют раствор Рингера с антибиотиками и инъецируют внутримышечно 600-800 мг в течение суток в три или четыре приема по 200 мг в каждой инъекции) переохлажденным самкам. Самок выдерживаемых или длительно транспортируемых при нерестовых температурах, инъецируют по 200-300 мг в сутки, в течение 2-4 суток.

Если производители после их доставки на завод, находятся в плохом состоянии – малоподвижны или переворачиваются вверх брюхом – им делают однократные инъекции 300 мг трийодтиронина. Ранние яровые формы осетровых используют при получении личинок для первого цикла (тура) или при задержке на IV стадии зрелости созревание ПК в терморегулируемых бассейнах для второго цикла.

Поздние яровые формы осетровых выдерживают 1-3 месяца, без регулирования температуры и получают от них личинок для второго цикла.

Работа с озимыми группами осетровых. К озимым относятся: озимый осетр летнего и осеннего хода в Волге, озимая севрюга в реках Волга, Кура, Дон, Кубань и озимая белуга Волги и Урала. Естественный нерест у озимых групп происходит в конце апреля-мае. Они составляют значительную долю нерестовой популяции, поэтому рыбоводное освоение их имеет большое значение.

Для получение зрелых половых продуктов от озимых форм осетровых используют две модификации комбинированного способа: экологический в сочетании с одной гипофизарной инъекцией и экологический в сочетании с повторными дробными инъекциями.

Сначала воспроизводят нормальные условия зимовки выдерживания производителей в зимовальных прудах или бассейнах с нерегулируемой температурой, что и в реке, или в терморегулируемых бассейнах при температуре 2-3 С. В этих условиях происходит значительный рост ооцитов, а через 9 месяцев гонады достигают завершенной IV стадии зрелости. После чего стимулируют созревание ПК с помощью гипофизарной инъекции. Стимулировать переход гонад из незавершенной в завершенную IV стадию зрелости удается и за более короткий срок при помощи повторных дробных инъекций. Например, самкам озимых осетров инъецируют небольшую дозу в 2-3 приема, а через 24 часа большую дозу.

Озимых осетровых можно использовать после выдерживания – для обеспечения первого тура, а при сдвиге полового цикла – второго тура.

Влияние внешних условий на действие гипофизарных инъекций и на рыбоводное качество икры.

Кроме исходного состояния самок (половых клеток, физиологического рыбы и др.), большое влияние на результаты гипофизарных инъекций и рыбоводное качество икры оказывают внешние условия, в которых содержатся самки до инъекции и в период созревания ПК. К этим условиям относятся температура, содержание в воде кислорода и проточность..

Рассмотрим действие этих факторов на примере осетровых. После инъекции ГРГ или его заменителя самкам, ооциты созревают только при нерестовых температурах. При температуре воды ниже 12-13 С или выше 25-26 С самки севрюги, например, обычно не реагируют на инъекцию созревания овоцитов. Более того они могут потерять способность отвечать на действие гонадотропных гормонов созреванием овоцитов даже если после этого наступит оптимальная для созревания ооцитов температура. Причем чем выше температура, тем быстрее самки теряют эту способность.

Потеря самками способности созревать под влиянием гипофизарной инъекции в результате воздействия неблагоприятных температур или выдерживания при нерестовых температурах обусловлена подавлением способности клеток фолликулярного эпителия выделять прогестерон и тем самым вызывать созревание овоциотов. Способность фолликулярного эпителия реагировать на действие ГТГ может быть восстановлена при помощи инъекций гормона щитовидной железы – трийодтиронина. Однако нужно знать, что трийодтиронин не оказывает действие на рыбоводное качество ооцитов и не снимает начавшихся явлений дегенерации овоцитов. Овоциты особенно чувствительны к действию неблагоприятных температур в конце периода созревания. Поэтому особенно важно, чтобы температура воды при выдерживании самок не выходила за пределы нерестовых тмператур.

Качество икры зависит не только от исходного состояния самок и температур, при которых их выдерживают после инъекции, но и от своевременного получения икры. Период от инъекции самок до получения от них зрелой икры называется периодом созревания. Установлено, что этот период значительно короче периода эмбрионального развития и составляет от последнего 17-23%.

Необходимо иметь ввиду, что чем дольше были резервированы самки, тем медленнее они созревают после введения гипофизарных инъекций и тем хуже получается от них икра. Свежевыловленные самки или резервированные менее чем 2-ое суток созревают первыми и икра от них получается наиболее качественная.

Оценка качества половых клеток рыб. Морфологическая и физиолого-биохимическая разнокачественность икры обусловлена многими факторами, среди которых важнейшими являются: физиологическое состояние самок, их возраст, условия нагула в преднерестовый период, расположение ооцитов в яичнике и особенно степень физиологического созревания и перезревания в нерестовый сезон. Разнокачественность овулировавшей икры предопределяет её различную оплодотворяемость, жизнеспособность развивающихся из неё эмбрионов и личинок, типичность роста личинок и физиолого-биохимичские характеристики.

В ястыках, наряду со зрелой икрой имеются недозрелые и перезрелые икринки. Иногда вся икра оказывается недозрелой или перезрелой. Особенно есть опасность получить какую-то часть икры непригодной к оплодотворению при использовании способа вскрытия. Поэтому при получении икры комбинированным способом (осетровые), часть икры получаемую после вскрытия полости тела самок рекомендуется собирать отдельно, так как в ней иногда содержится большой процент неоплодтворенных яиц.

Использование перезревшей икры (на срок до 2-х недель у лососевых) приводит к снижению устойчивости развивающихся эмбрионов к воздействию факторов внешней среды.

Отход личинок из перезрелой икры превышает в 1,5 раза отход личинок из нормальной икры. Кроме того, оплодотворение перезрелой икры ведет к получению повышенного количества самцов.

Необходимо отметить, что рыбоводные качества перезрелой икры осенне-нерестующих рыб сохраняются от нескольких дней до нескольких недель, а весенне-нерестующих – всего несколько часов. Перезревание икры осетровых рыб на 6-8 часов ухудшает её рыбоводные качества настолько, что делает её совершенно непригодной для рыбоводных целей. Перезревшая икра становится не способной к оплодотворению и развитию в результате физиолого-биохимической и структурной деградации. Недозревшая икра не может быть оплодотворена и погибает.

Количество и качество икры и спермы полученных от рыб может быть различным. Хорошая икра легко отличается от плохой по внешнему виду (по форме, окраске, упругости и т. д.). В хорошей икре при благоприятных условиях оплодотворяются и нормально развиваются не менее 80-90% икринок; плохая икра отличается низким процентом оплодотворения. Часть оплодотворенной икры низкого качества развивается не нормально и в период инкубации погибает (перезрелая икра, результат её долгого нахождения в брюшной полости самок). Качество икры у осетровых определяют с помощь. Раствора метиленовой сини (1 капля 0,05% —ного раствора метиленовой сини в 10 мл профильтрованной воды). Для этого 1 см икры помещают в 5 см раствора и встряхивают. В случае доброкачественности икры раствор обесцвечивается через 10-15 минут, при перезревании икры через 30-60 минут, а при незрелости икры раствор н обесцвечивается.

Надежным способом определения качества икры является наблюдение за процессом эмбрионального развития в период инкубации (прежде всего определяется % оплодотворения на начальных этапах дробления и гаструляции.

Процент оплодотворения для икры карповых и лососевых устанавливают в период дробления, когда зародышевый диск состоит из 16 и более бластомеров устанавливают либо на стадии завершенного второго деления, либо на стадии гаструляции.

Чтобы определить % оплодотворения берут пробу из общего количества икры, которое заложено на инкубацию. Проба икры лососевых – 100-15- икринок «__________» карповых и осетровых – 300-400 икринок. Икринки лососевых просматривают без оболочки, которую перед этим снимают. Если требуется определить процент полиспермии яиц у осетровых, то взятую пробу фиксируют в 4-х процентном формалине, а затем просматривают под бинокуляром или лупой. В анализируемой пробе нормальные моноспермные яйца имеют в это время 4-е бластулы, а полиспермные – 6 и более. При качественной икре и соблюдении технологии осеменения процент полиспермных яиц не более 5%.

Икру в воде держать долго нельзя. Например, при выдерживании икринок осетровых в воде более 40-50 минут происходило набухание оболочек икринок по всей поверхности, при этом микропиле закрывались и икринки не могли уже оплодотворяться , то есть погибали.

По данным А.С. Гинзбург и Т.А. Детлаф (1969) оплодотворяемость икры, взятой у самок и помещенной в воду быстро утрачивается. Например, икра щуки и рыбца через 1 минуту после помещения в воду оказывается полностью не способной к оплодотворению. Через несколько минут теряет способность к оплодотворению икра многих лососевых. Это всегда следует помнить при использовании мокрого и полусухого способов осеменения икры. Важное значение имеет качество спермы. Сперматозоиды неподвижны пока находятся в спермиальной жидкости. При попадании в воду они тут же активизируются и начинают энергично, но недолго плавать. Длительность движения спермиев в воде и является показателем их активности. В период активности спермиев выделяют 2-е стадии: поступательного и колебательного движения. В связи с тем, что оплодотворение икры осуществляется в период поступательного движения спермиев, длительность этого движения является для рыбоводов очень важным показателем, который и характеризует качество спермы.

Активность спермиев в воде различна во времени у разных видов рыб и колеблется от нескольких секунд (у костистых) до нескольких часов у осетровых. У некоторых рыб, например, лососевых спермии становятся активными не только в воде, но и в полостной жидкости. У большинства рыб (в зависимости от вида) поступательное движение сперматозоидов сохраняется в течение от 25 сек. До 10 минут. Только небольшая часть спермиев осетровых рыб продолжает активно плавать в воде до 20 минут, а в некоторых случаях до 2-4 часов (осетровые рыбы).

Постепенно поступательное движение сперматозоидов ослабевает и переходит в колебательное движение, при котором они не передвигаются в воде. При колебательном движении сперматозоиды уже не могут проникнуть в икринки и теряют оплодотворяющую способность. Затем это движение прекращается, сперматозоиды становятся неподвижными и погибают.

В семенной жидкости сперматозоиды не тратят энергии на движение и сохраняют в ней оплодотворяющую способность значительно дольше, чем в воде. Особенно это проявляется при низких температурах. Так, если содержать пробирки или бюксы со спермой на льду, сперматозоиды могут быть активированы водой после нескольких суток хранения.

У большинства рыб концентрация спермиев очень высокая – от 5 до 30 млн. шт/мкл (мкл.- микролитр – 0,000001 л) и значительно выше, чем у животных с внутренним оплодотворением , что связано с приспособлением к оплодотворению в сложных условиях внешнего осеменения икры (течение воды, снос спермиев и др.) Существует зависимость между продолжительностью движения сперматозоидов в воде и возрастом самцов. Наибольшая подвижность сперматозоидов отмечается у самцов среднего возраста, меньшая у более молодых и старых особей.

Продолжительность периода сохранения подвижности и оплодотворяющей способности зависит как от вида рыб, так и от условий внешней среды (прежде всего температуры воды) и индивидуальной способности производителей. Например, сперматозоиды щуки при температуре 5 С сохраняют подвижность около 2 минут; при температуре 10 С – 1,5 минуты, при температуре 15 С – 1 минута.

Качество спермы определяют по концентрации сперматозоидов в 1 мм , продолжительности и характеру их движения и оплодотворяющей способности. Концентрацию спермы определяют в камере Горяева; продолжительность движения устанавливают с помощью секундомера, а оплодотворяющую способность выявляют по проценту оплодотворения икры. Ориентировочно качество спермы можно определять по пятибальной шкале Г. М. Персова. Пятью баллами оценивается сперма отличного качества, когда заметна подвижность всех сперматозоидов и трудно акцентировать внимание на каком-то одном экземпляре; четырьма баллами – оценивается хорошая сперма, когда поступательное движение сперматозоидов ярко выражено, но в поле зрения встречаются сперматозоиды с зигзагообразными колебательными движениями.

Тремя баллами оценивается сперма удовлетворительного качества когда зигзагообразное и колебательное движение преобладает над поступательным и имеются неподвижные сперматозоиды..

При оценке в два балла поступательного движения сперматозоидов практически нет, имеется только колебательное и изредка зигзагообразное, до 75% сперматозоидов неподвижны.

При оценке в 1 балл – все сперматозоиды неподвижны. Сперма с оценкой 1-2 балла для осеменения икры не пригодна. О качестве спермы можно судить по её цвету и консистенции. Сперма хорошего качества желтовато-кремовая, густая как сметана; среднего качества – белая, консистенция сливок, плохого качества – голубоватая, жидкая.

0

Оставьте ответ

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *